1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用，不可在冰中放置過(guò)長(zhǎng)時(shí)間。

2. 不能用移液器抽吸感受態(tài)細(xì)胞，用手指輕彈混勻即可。

3. 質(zhì)粒使用量<50 ng即可獲得很好的轉(zhuǎn)化。

1. 從-80 ℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞，放入冰中5 min，加入目的質(zhì)粒或連接產(chǎn)物，輕彈使混合均勻，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴鍋中熱激90 s，立即插入冰中靜置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液體培養(yǎng)基，37℃搖床220 rpm培養(yǎng)60 min；

4. 離心（質(zhì)粒轉(zhuǎn)化無(wú)需離心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均勻涂布抗性平板，37℃培養(yǎng)箱放置過(guò)夜。