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支原體檢測試劑盒 說明書

更新時間:2024-08-16      點擊次數:1347

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支原體污染會對細胞各個方面都造成不良影響,已經成為細胞培養中高度重視的問題,因此,定期進行支原體污染檢測是十分必要的。本支原體檢測試劑盒是采用PCR方法,特異性的檢測各種培養細胞生物材料(如細胞培養物、實驗動物分泌物、動物血清等)中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物是針對支原體16s rRNA序列的保守區域設計的特異性引物,可直接使用細胞培養液作為PCR模板,特異性擴增支原體DNA,搭配配套的Mycoplasma PCR Mix(2×)一小時內即可完成,本試劑盒檢測靈敏度高,可檢測低至20個拷貝的支原體。



組成

78EA10015-50T

Mycoplasma PCR Mix(2×)

1 mL

Mycoplasma Primer Mix

100 μL

Positive Control

50 μL

Mycoplasma Free Water

1 mL










使用方法

1. 樣品準備:取適量待檢細胞培養上清于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用無支原體去離子水水稀釋后,取適量樣本于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板;

2. PCR體系配制:每次實驗需設置陰性對照(將1 μL待檢樣品換成等量的無支原體去離子水)與陽性對照(在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template),實驗時戴一次性口罩與手套,謹慎操作,防止操作不當引入外源支原體污染;

3. PCR程序設置

步驟

溫度

時間

周期

Initial Denaturation

98℃

2 min

1

Denaturation

98℃

20 s

30

Annealing

56℃

25 s

Extension

72℃

10 s

Final extension

72℃

5 min

1

Hold

4-16℃

Forever













4. 凝膠電泳:取10 μL PCR產物,使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測;

 

5. 結果分析:每次實驗通過與陰性對照、陽性對照檢測結果比較確認樣品支原體污染情況,陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結果中有條帶很有可能是P


CR體系中出現污染,建議重新實驗確認結果。如有必要,也可對PCR產物進行常規測序,以確定具體的支原體種屬。



貨號品名規格品牌
78EA10015-50TPCR法支原體檢測試劑盒50TBiohub


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