細胞培養技術創建于二十世紀初，歷經一個多世紀的發展，現在已成為生命科學領域越來越重要的實驗技術之一。由于細胞的特殊性，在細胞培養過程中，或在細胞建株和建系過程中，隨著傳代次數的增加，細胞的各種生物特性都會逐漸發生變化。因此，原始細胞種子的及時保存就顯得尤為必要。在雜交瘤單抗的制備過程中，雜交瘤細胞以及克隆化得到的亞克隆細胞的凍存，是bi不可少的操作。因為在沒有建立一個穩定的細胞系或穩定分泌抗體的細胞系的時候，在細胞的培養過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等緣故而導致實驗失敗，如果沒有原始細胞的凍存，則將因為上述的意外而前功盡棄。除此之外，購買、交換和運送某些細胞也需要利用細胞凍存的形式來進行。因此，及時方便地進行細胞的凍存在實際工作中顯得十分必要。

細胞凍存要取得好的效果，多采用血清、甘油或二甲基亞砜(DMSO)等作為保護劑，最大限度的保存細胞活力。這些物質有些能提高細胞膜對水的通透性，在緩慢冷凍過程中可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。同時，有些保護劑在細胞外也能減輕溶液中高濃度溶質對細胞的損傷，進一步避免細胞在冷凍和復蘇過程中受到損傷。滲透性保護劑DMSO和非滲透性保護劑血清(主要含白蛋白)是使用最為廣泛，效果最為穩定可靠的。

此外，采用“慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。復蘇細胞采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

現有凍存方法存在的問題:

1、DMSO對細胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，尋找其它替代物是最hao的選擇。但是目前，該技術領域還未發現凍存保護效果能與DMSO媲美的物質，因此，聯合其它成分，形成新的配方，降低DMSO的含量就成了較為現實的選擇。

2、血清，即使是純化得到的白蛋白，由于其動物來源的特性，會極大增加帶來病毒等感染物質的可能。而且，血清來源受限，價格昂貴，所以其使用也必然會受到越來越多的限制。因此，尋找替代血清的非滲透性保護劑也顯得尤為必要。

3、目前，zui成熟和zui穩定的凍存細胞技術是將加有保護劑的細胞懸液置于-196℃液氮中，這樣可以使細胞暫時脫離生長狀態而保持細胞的特性，在需要的時候經過復蘇程序，使得細胞重新生長增殖以用于實驗。細胞儲存在-196℃液氮中，理論上儲存時間是無限的，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經過程序降溫，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜)，最后才移至液氮罐中進行長期的儲存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量的死亡。)

市面上“無血清細胞凍存液"獲得了廣大科研工作者的喜愛。 而本公司提供的一種新的凍存液體系: 無血清低DMSO細胞凍存液78EC10001，不僅可以省卻對血清的使用，而且還顯著降低了DMSO的用量。同時，本專li細胞凍存液凍存的細胞懸液可以直接放置于-80℃冰箱，既不需要繁瑣的程序降溫或采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮中，節省了大量時間和精力。該細胞凍存液通用于人和各種動物細胞株。特別配方(主要成分為5% DMSO和氨基酸)具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含血清及動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養細胞的凍存，也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。

產品特點:

1. 高安全性，不含血清及動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性。

2. 低DMSO，DMSO的含量為10%(v/v)，極大降低了對細胞潛在的毒性作用。

3. 細胞存活率高，無批次差異。

4. wan全凍存液配方，可直接使用，方便簡捷。

5. 可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)，不需要采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮。

6. 可原位凍存，比如雜交瘤細胞的亞克隆，可以大規模減少工作量，避免污染。

凍存效果對比:

圖1. 小鼠成纖維細胞3T3細胞復蘇后細胞狀態對比圖

對照B:存活率89% 本產品:存活率97%

圖2. 人胚腎細胞293E細胞復蘇后細胞狀態對比圖

對照B:存活率86% 本產品:存活率93%

注:對照A: DMEM培養基+10%血清+10%DMSO，液氮凍存;

對照B: 無血清細胞凍存液(DMSO 10% v/v);

附:通用細胞凍存液，無血清細胞凍存液、無血清低DMSO細胞凍存液的比較